細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)服務(wù)
|
服務(wù)編碼
|
項(xiàng)目名稱
|
項(xiàng)目報(bào)價(jià)
|
項(xiàng)目周期
|
|
BT5001
|
細(xì)胞培養(yǎng)
|
2000元
|
1-2周
|
|
BT5002
|
細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
|
3000元
|
1-2周
|
|
BT5003
|
穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建
|
咨詢
|
咨詢
|
一、服務(wù)內(nèi)容
1、細(xì)胞轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株篩選
通過轉(zhuǎn)染試劑或電穿孔方式等方式，將目的基因?qū)胭N壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞24-48小時(shí)后，目的基因即在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。此時(shí)為了建立穩(wěn)定細(xì)胞系，可根據(jù)不同基因載體中所含的抗性標(biāo)記，選用相應(yīng)的藥物對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選，從而得到穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆。觀察目的基因及其表達(dá)蛋白在某種細(xì)胞中的功能（短時(shí)間即可進(jìn)行觀察，但效應(yīng)會(huì)很快丟失）。
2、針對(duì)不同種類細(xì)胞使用藥物，低氧，壓力等外源因素進(jìn)行刺激等處理，建立相關(guān)的細(xì)胞模型，從而進(jìn)行后續(xù)的研究工作。
二、樣品要求（樣品處理及保存見附件）
1干冰運(yùn)輸：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化后低速離心1000rpm，5min收集細(xì)胞，加入適量配制好的凍存液后吹打均勻。將細(xì)胞分裝入凍存管中，標(biāo)明細(xì)胞的名稱、細(xì)胞代次、凍存時(shí)間及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃過液，然后放入液氮罐；細(xì)胞數(shù)目不少于5×106/ml；
2常溫運(yùn)輸：細(xì)胞貼壁覆蓋瓶底面積達(dá)40%以上時(shí)，裝滿培養(yǎng)液，瓶口用封口膜封好，裝入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞滿，讓瓶子固定在盒子中。
三、服務(wù)特點(diǎn)
1、針對(duì)不同細(xì)胞系篩選合適的轉(zhuǎn)染試劑和質(zhì)粒濃度配比，提高轉(zhuǎn)染效率和蛋白表達(dá)量
2、豐富的抗生素篩選經(jīng)驗(yàn)和單細(xì)胞克隆鑒定方法提高實(shí)驗(yàn)效率
3、構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株可穩(wěn)定傳代，極少發(fā)生性狀丟失
四、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
|
服務(wù)項(xiàng)目
|
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)￥
|
實(shí)驗(yàn)周期
|
|
蛋白瞬時(shí)表達(dá)或敲低
|
|
基因表達(dá)或敲低載體構(gòu)建
|
請(qǐng)參見載體構(gòu)建目錄
|
2-3周
|
|
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
|
700/質(zhì)粒
|
1周
|
|
載體轉(zhuǎn)染
|
3000/樣品
|
1周
|
|
Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)或敲低
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
|
蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建（混合克隆）
|
|
表達(dá)載體構(gòu)建
|
請(qǐng)參見載體構(gòu)建目錄
|
2-3周
|
|
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
|
700/質(zhì)粒
|
1周
|
|
轉(zhuǎn)染和抗生素篩選
|
40000/細(xì)胞系
|
3-4周
|
|
Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
|
蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建（單克?。?/span>
|
|
表達(dá)載體構(gòu)建
|
請(qǐng)參見載體構(gòu)建目錄
|
2-3周
|
|
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
|
700/質(zhì)粒
|
1周
|
|
轉(zhuǎn)染和抗生素篩選
|
50000/細(xì)胞系
|
6-8周
|
|
Western Blot檢測(cè)穩(wěn)定細(xì)胞株蛋白表達(dá)
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
|
蛋白敲低細(xì)胞系構(gòu)建（單克?。?/span>
|
|
shRNA表達(dá)載體的構(gòu)建
|
請(qǐng)參見載體構(gòu)建目錄
|
2-3周
|
|
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
|
700/質(zhì)粒
|
1周
|
|
轉(zhuǎn)染和抗生素篩選
|
60000/細(xì)胞系
|
6-8周
|
|
Western Blot檢測(cè)敲低細(xì)胞株蛋白表達(dá)
|
2000/目的蛋白/膜
|
2周
|
|
蛋白真核表達(dá)（分泌表達(dá)）
|
|
分泌型表達(dá)載體的構(gòu)建
|
請(qǐng)參見載體構(gòu)建目錄
|
2-3周
|
|
質(zhì)粒大提（含去內(nèi)毒素）
|
700/質(zhì)粒
|
1周
|
|
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
|
3000/質(zhì)粒
|
2周
|
|
蛋白表達(dá)檢測(cè)（Western Blot或 ELISA）
|
2000/目的蛋白/膜；600/板
|
2周
|
|
蛋白表達(dá)和純化
|
20000/mg
|
2周
|
五、客戶提供材料
1、待克隆基因和載體信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如無相關(guān)shRNA序列信息，本公司可代為設(shè)計(jì)并收取相關(guān)費(fèi)用）；
2、待轉(zhuǎn)染細(xì)胞株（如需使用常用腫瘤細(xì)胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、陽性對(duì)照樣品（盡量提供）
4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）
六、提交給客戶結(jié)果
1、構(gòu)建完成的載體和甘油菌株；
2、完整測(cè)序報(bào)告和序列堿基圖
3、載體真核表達(dá)鑒定結(jié)果
4、載體真核表達(dá)蛋白
5、穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株>1×107
6、穩(wěn)定敲低細(xì)胞株>1×107
7、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包括基因擴(kuò)增圖，細(xì)胞株過表達(dá)和敲低檢測(cè)結(jié)果圖等）
